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剑麻酵母双杂交cDNA表达文库的构建及与AhKNOX2相互作用蛋白的筛选

杨子平  孙艺桓  杨倩  鹿志伟  张燕梅  李俊峰  周文钊  
【摘要】:植物KNOX可以通过蛋白质相互作用参与调控落果、纤维细胞发育、次生细胞壁发育、开花等事件。为筛选剑麻叶中与AhKNOX2相互作用的蛋白,采用SMART同源重组技术构建了剑麻叶片酵母双杂交表达文库,利用AhKNOX2为诱饵载体筛选了与之相互作用的蛋白。结果表明,文库总容量为3.9×10~6 cfu,转化效率为9.15×10~5 cfu/μg pGADT7-Rec,插入片段大小主要分布于0.5 kb至3.0 kb间,重组率为92%;保存的文库细胞密度为1.35×10~8/mL,文库滴度为2.22×10~7 cfu/mL。构建的putf-8T7-AhKNOX2诱饵载体存在自激活性,5mM的AT能抑制诱饵载体的自激活性,通过筛选获得了16个与AhKNOX2相互作用的蛋白。本文成功构建剑麻叶片交母表达文库,并获得与AhKNOX2相互作用的蛋白,为进一步龙八AhKNOX2在剑麻中的功能奠定基础。

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